कुछ द्वितीयक उपापचयी मार्ग हैं जिन्हें प्रकाश या अंधेरे की उपस्थिति से प्रेरित किया जा सकता है; यहाँ तो, माध्यम और संस्कृति की विधि के अलावा, ऐसे अन्य कारक हैं जो कोशिका संवर्धन द्वारा द्वितीयक चयापचयों के उत्पादन को प्रभावित करते हैं।
प्रकाश इन विट्रो में दी गई संस्कृति को सकारात्मक या नकारात्मक रूप से प्रभावित कर सकता है, उसी तरह जो प्रकृति में होता है; इसलिए, उत्पादित होने वाले द्वितीयक मेटाबोलाइट के प्रकार के संबंध में भी मौजूद या अनुपस्थित रहेगा।
प्रकाश को एक स्विच माना जा सकता है जो हमें विशिष्ट चयापचय मार्गों को चालू या बंद करने की अनुमति देता है। इसका मूल्यांकन न केवल उपस्थिति या अनुपस्थिति के संदर्भ में किया जाना चाहिए, बल्कि तीव्रता (प्रकाश की मात्रा), गुणवत्ता (तरंगदैर्ध्य) और फोटोपेरियोड (24 घंटे से अधिक प्रकाश और अंधेरे के घंटे) के संदर्भ में भी किया जाना चाहिए।
वातन, जो ऑक्सीजन और कार्बन डाइऑक्साइड के बीच का संबंध है, सक्रिय अवयवों के उत्पादन को उत्तेजित या दबा सकता है; इसलिए यह जानना अच्छा है कि क्या कोशिकाओं को एनोक्सिया में रखने से जैव प्रौद्योगिकीविद् के अंतिम लक्ष्य पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है।
इन विट्रो कल्चर का इष्टतम तापमान 25 और 30 डिग्री सेल्सियस के बीच होता है; हालांकि, उचित अपवाद हैं। किसी भी मामले में, एक थर्मल भिन्नता माध्यमिक चयापचयों के उत्पादन में किसी तरह से हस्तक्षेप करने में सक्षम तनाव का प्रतिनिधित्व करती है।
इन विट्रो संस्कृति में पीएच अक्सर समय के साथ परिवर्तनशील होता है, क्योंकि कोशिकाएं लगातार उपचय और अपचय करती हैं; लेकिन इसमें भारी बदलाव एक बार फिर सक्रिय सिद्धांतों के उत्पादन को प्रभावित कर सकता है; इसलिए इसकी लगातार एक केमोस्टैट के साथ निगरानी की जानी चाहिए।
एलिसिटेशन एक बायोटेक्नोलॉजिकल शब्द है जो फसल पर दो तरह से निर्धारित तनाव-उत्प्रेरण उत्तेजना को इंगित करता है: जैविक या अजैविक।उत्तोलन, यानी तनाव का समावेश, अजैविक एक शारीरिक तनाव से मेल खाता है, जैसे कि यूवी विकिरण या भारी धातुओं का उपयोग, जबकि जैविक उत्कर्ष एक इन विट्रो तनाव से मेल खाता है, जो प्रकृति में पौधे के लिए फाइटोपैथोजेन्स की आक्रामकता की नकल करता है। (सावधान रहना कि कोशिका बीमार न हो)। इसलिए, एक बार रोगज़नक़ के हमले के जवाब में द्वितीयक चयापचयों के उत्पादन का पता चलने के बाद, अवांछित सूक्ष्मजीवों को नष्ट करने के लिए संस्कृति को आटोक्लेव स्वच्छता के अधीन किया जाता है।
ये सभी कारक, खेती की विधि और संस्कृति माध्यम की विभिन्न संरचना के साथ, फसल को पर्याप्त रूप से विकसित होने और इसके द्वितीयक चयापचयों का उत्पादन करने की अनुमति देते हैं। इन विट्रो में खेती की जाने वाली प्रत्येक पौधे की प्रजातियों को इन सभी कारकों के व्यक्तिगत अनुकूलन की आवश्यकता होती है, इनमें से संस्कृति माध्यम में हार्मोन की उपस्थिति भी होती है। जैव प्रौद्योगिकी क्षेत्र में सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले हार्मोन ऑक्सिन, जिबरेलिन और साइटोकिन्स हैं; एथिलीन बहुत आम नहीं है। उपयोग किया जाता है; एब्सिसिक एसिड का उपयोग दैहिक भ्रूण की पीढ़ी को प्रेरित करने के लिए किया जाता है। इन हार्मोनल वर्गों की उपस्थिति या अनुपस्थिति, उनकी सांद्रता और उनके मात्रात्मक अनुपात, इन विट्रो संस्कृति के माध्यमिक चयापचयों या कभी-कभी एक निश्चित डिग्री के भेदभाव के उत्पादन के बजाय विकास को निर्धारित करते हैं। इसलिए कोशिकाओं को स्थापित लक्ष्य की ओर मार्गदर्शन करने के लिए हार्मोनल वर्गों की उपस्थिति आवश्यक है।
जैव-प्रौद्योगिकी परियोजना शुरू करने से पहले, उन सभी चयापचय मार्गों को गहराई से जानना आवश्यक है जो कोशिका संवर्धन के विरुद्ध जा सकते हैं; यह भी क्योंकि ये मार्ग एकदिशीय हैं और प्राथमिक चयापचय से माध्यमिक की ओर जाते हैं (कभी भी दूसरी तरफ नहीं, यही कारण है कि प्राथमिक मेटाबोलाइट माध्यमिक वाले के अग्रदूत होते हैं।)
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